No presente estudo, uma reação imunoenzimática (ELISA) padronizada com o fluido vesicular de cisticercos de Taenia solium foi utilizada para avaliar as respostas de anticorpos anti-cisticercos IgG (total e subclasses) e IgE em amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose apresentando produção intratecal de anticorpos específicos IgG e pacientes com outras desordens neurológicas. Os seguintes resultados foram obtidos: ELISA-IgG: 100% de sensibilidade (mediana das absorbâncias das reações ELISA (MAE)=1,17) e especificidade 100%; ELISA-IgG1: sensibilidade 72,7% (MAE=0,49) e especificidade 100%; ELISA-IgG2: sensibilidade 81,8% (MAE=0,46) e especificidade 100%; ELISA-IgG3: sensibilidade 63,6% (MAE=0,12) e especificidade 100%; ELISA-IgG4: sensibilidade 90,9% (MAE=0,85) e especificidade 100%; ELISA-IgE: sensibilidade 93,8% (MAE=0,60) e especificidade 100%. Não foram encontradas diferenças significativas entre as sensibilidades e especificidades das reações ELISA-IgG e ELISA-IgE, embora a MAE da reação ELISA-IgG em amostras de LCR de pacientes com neurocisticercose tenha sido significativamente maior que a obtida com ELISA-IgE. Os valores de sensibilidade e MAE da reação ELISA-IgG4 foram maiores que os valores correspondentes para as outras subclasses da IgG. Estudos futuros deverão abordar a contribuição dos anticorpos IgG4 e IgE na fisiopatologia da neurocisticercose.

In the present study, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) standardized with vesicular fluid of Taenia solium cysticerci was used to screen for IgG (total and subclasses) and IgE antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) samples from patients with neurocysticercosis showing intrathecal production of specific IgG antibodies and patients with other neurological disorders. The following results were obtained: IgG-ELISA: 100% sensitivity (median of the ELISA absorbances (MEA)=1.17) and 100% specificity; IgG1-ELISA: 72.7% sensitivity (MEA=0.49) and 100% specificity; IgG2-ELISA: 81.8% sensitivity (MEA=0.46) and 100% specificity; IgG3-ELISA: 63.6% sensitivity (MEA=0.12) and 100% specificity; IgG4-ELISA: 90.9% sensitivity (MEA=0.85) and 100% specificity; IgE-ELISA 93.8% sensitivity (MEA=0.60) and 100% specificity. There were no significant differences between the sensitivities and specificities in the detection of IgG-ELISA and IgE-ELISA, although in CSF samples from patients with neurocysticercosis the MEA of the IgG-ELISA was significantly higher than that of the IgE-ELISA. The sensitivity and MEA values of the IgG4-ELISA were higher than the corresponding values for the other IgG subclasses. Future studies should address the contribution of IgG4 and IgE antibodies to the physiopathology of neurocysticercosis.

OBJETIVO: Avaliar o desempenho de duas preparações antigênicas (líquido vesicular - LV e uma fração glicoprotéica, fração LL a-Gp, purificada do extrato total dos parasitas por cromatografia de afinidade com lentil lectina) de cisticercos de Taenia solium para o imunodiagnóstico da neurocisticercose. MÉTODO: Cinquenta e seis amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) (22 de pacientes com neurocisticercose e 34 de pacientes com outras doenças neurológicas) e 57 amostras de soro (22 de pacientes com neurocisticercose, 18 de pacientes com outras infecções e 17 de pessoas presumivelmente sadias) foram analisadas quanto à presença de anticorpos IgG anti-cisticercos com uma reação imunoenzimática (ELISA). RESULTADOS: A reação ELISA LV apresentou 100% de sensibilidade e especificidade em amostras de LCR e soro, enquanto a sensibilidade e a especificidade da reação ELISA LLa-Gp em amostras de LCR e soro foram de 90,9% e 97,1% e 95,5% e 100%, respectivamente. Não foram encontradas diferenças significativas na sensibilidade e especificidade das duas preparações antigênicas utilizadas, tanto para amostras de LCR como para amostras de soro. CONCLUSÃO: Considerando a complexidade e o alto custo de obtenção da fração LLa-Gp, o LV pode ser mais adequado para a pesquisa de anticorpos específicos por ELISA em amostras de LCR e soro de pacientes com neurocisticercose.

OBJECTIVE: To evaluate the performance of two antigenic preparations (vesicular fluid - VF and a glycoprotein fraction, LLa-Gp fraction, purified from a whole parasite extract by lentil lectin affinity chromatography) from Taenia solium cysticerci for the immunodiagnosis of neurocysticercosis. METHOD: Fifty-six cerebrospinal fluid (CSF) samples (22 from patients with neurocysticercosis and 34 from patients with other neurological disorders) and 57 serum samples (22 from patients with neurocysticercosis, 18 from patients with other infections and 17 from presumably healthy persons) were assayed for anticysticercal IgG antibodies with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The VF ELISA showed 100% sensitivity and specificity in CSF and serum samples, whereas the sensitivity and specificity of the LLa-Gp ELISA were, respectively, 90.9% and 97.1%, with the CSF samples and 95.5% and 100% with serum samples. There was no significant difference in the sensitivity and specificity of the two antigenic preparations used to screen CSF and serum samples. CONCLUSION: Considering the complexity and high cost of obtaining the LLa-Gp fraction, VF could be more suitable for screening specific antibodies by ELISA in CSF and serum samples from patients with neurocysticercosis.

INTRODUCTION: Epstein-Barr virus exposure appears to be an environmental trigger for rheumatoid arthritis that interacts with other risk factors. Relationships among anti-cyclic citrullinated peptide antibodies, the shared epitope, and smoking status have been observed in patients with rheumatoid arthritis from different populations. OBJECTIVE: To perform an association analysis of anti-Epstein-Barr nuclear antigen-1 antibodies, anti-cyclic citrullinated peptide antibodies, the shared epitope, and smoking status in Brazilian patients with rheumatoid arthritis. METHODS: In a case-control study, 140 rheumatoid arthritis patients and 143 healthy volunteers who were matched for age, sex, and ethnicity were recruited. Anti-Epstein-Barr nuclear antigen-1 antibodies and anti-cyclic citrullinated peptide antibodies were examined using an enzyme-linked immunosorbent assay, and shared epitope alleles were identified by genotyping. Smoking information was collected from all subjects. A comparative analysis of anti-Epstein-Barr nuclear antigen-1 antibodies, anti-cyclic citrullinated peptide antibodies, the shared epitope, and smoking status was performed in the patient group. Logistic regression analysis models were used to analyze the risk of rheumatoid arthritis. RESULTS: Anti-Epstein-Barr nuclear antigen-1 antibodies were not associated with anti-cyclic citrullinated peptide antibodies, shared epitope alleles, or smoking status. Anti-cyclic citrullinated peptide antibody positivity was significantly higher in smoking patients with shared epitope alleles (OR = 3.82). In a multivariate logistic regression analysis using stepwise selection, only anti-cyclic citrullinated peptide antibodies were found to be independently associated with rheumatoid arthritis (OR = 247.9). CONCLUSION: Anti-Epstein-Barr nuclear antigen-1 antibodies did not increase the risk of rheumatoid arthritis and were not associated with the rheumatoid arthritis risk factors studied. Smoking and shared epitope alleles were correlated with anti-cyclic citrullinated peptide-antibody-positive rheumatoid arthritis. Of the risk factors, only anticyclic citrullinated peptides antibodies were independently associated with rheumatoid arthritis susceptibility.

OBJETIVO: Determinar a concentração de alfa 1-antitripsina (AAT) e a prevalência dos alelos S e Z em indivíduos sintomáticos respiratórios crônicos. MÉTODOS: Pacientes com tosse crônica e dispnéia foram submetidos à avaliação clínica, espirometria, tomografia computadorizada de tórax, dosagem de AAT por nefelometria e pesquisa das mutações S e Z por reação em cadeia da polimerase. Foram consideradas como variáveis dependentes a concentração de AAT e o tabagismo. RESULTADOS: Dos 89 pacientes incluídos no estudo (44 mulheres; idade média, 51,3 ± 18,2 anos), os alelos S e Z foram detectados em 33,3% e 5,7%, respectivamente, com freqüência gênica dos alelos S e Z de 0,16 e 0,028. Dois pacientes tinham genótipo SZ (AAT < 89 mg/dL). Os pacientes foram divididos em grupos segundo a concentração de AAT: < 89 mg/dL (deficiência, nenhum grupo); 90-140 mg/dL (faixa intermediária, Grupo 1, n = 30); e > 141 mg/dL (normal, Grupo 2, n = 57). A freqüência de fumantes foi igual nos dois grupos, com carga tabágica maior no Grupo 2. O alelo S estava presente em 13 e 14 pacientes dos Grupos 1 e 2, respectivamente, enquanto que o alelo Z estava presente em 2 e 1 paciente dos mesmos grupos. Não houve diferença nos testes de função pulmonar, nem na freqüência de bronquiectasias ou enfisema entre os dois grupos. Os valores espirométricos e as concentrações de AAT foram similares entre fumantes e não-fumantes. Bronquiectasias foram mais freqüentes entre os não fumantes, e enfisema foi mais freqüente entre os fumantes. CONCLUSÕES: Trinta pacientes apresentaram níveis de AAT abaixo da média esperada para os genótipos MM e MS, e este fato não pode ser explicado por uma freqüência maior dos alelos S e Z.

OBJECTIVE: To determine the levels of alpha-1 antitrypsin (AAT) and the presence of S and Z alleles in patients with chronic respiratory symptoms. METHODS: Patients with chronic cough and dyspnea were submitted to clinical evaluation, pulmonary function tests, high-resolution computed tomography, nephelometric determination of AAT and determination of S and Z alleles by polymerase chain reaction. Smoking and AAT levels were considered the dependent variables. RESULTS: Of the 89 patients included in the study, 44 were female. The mean age was 51.3 ± 18.2 years. The S and Z alleles were detected in 33.3% and 5.7%, respectively, and the gene frequency was 0.16 and 0.028, respectively. Two patients were SZ heterozygotes (AAT levels < 89 mg/dL). The patients were divided into groups based on AAT level: < 89 mg/dL (deficiency, no group); 90-140 mg/dL (intermediate, Group 1, n = 30); and > 141 mg/dL (normal, Group 2, n = 57). The frequency of smokers was the same in both groups, although tobacco intake was greater in Group 2. The S allele was present in 13 and 14 patients in Groups 1 and 2, respectively, whereas the Z allele was present in 2 and 1 patient in the same groups. There was no difference in the results of pulmonary function tests or in the frequency of bronchiectasis or emphysema between the two groups. Spirometric values and AAT levels were similar in smokers and nonsmokers. Bronchiectasis was more common in nonsmokers, and emphysema was more common in smokers. CONCLUSIONS: Thirty patients presented AAT levels lower than the mean values found in patients with the MM or MS genotype, and this fact could not be explained by an increased frequency of S and Z alleles.

Quarenta e seis pacientes receptores de transplantes de células progenitoras hematopoéticas (TCPH) foram monitorados em relação à infecção ativa por citomegalovírus (CMV). Testes sorológicos imunoenzimáticos foram utilizados para a detecção de anticorpos IgM e elevação significativa das concentrações de anticorpos IgG (aumento IgG), nested-PCR (N-PCR) foi utilizada para a detecção de CMV-DNA e antigenemia (AGM) para a detecção de antígenos virais. A presença de CMV-IgM e/ou CMV-aumento IgG foi detectada em 12/46 (26,1%) pacientes, sendo o tempo mediano entre o transplante e a detecção dos marcadores sorológicos de 81,5 dias; AGM positiva foi detectada em 24/46 (52,2%) pacientes, sendo o tempo mediano entre o transplante e a detecção de antígenos virais de 62 dias. Dois ou mais resultados positivos consecutivos de N-PCR foram detectados em 32/46 (69,5%) pacientes, sendo o tempo mediano entre o transplante e o primeiro teste positivo de 50,5 dias. Esses resultados confirmaram que a AGM e principalmente a PCR são superiores à sorologia, com relação ao diagnóstico da infecção pelo CMV. Seis pacientes apresentaram reações CMV-IgM positivas e/ou CMV-aumento IgG com reações negativas de AGM (cinco casos) ou N-PCR (um caso). Em cinco desses casos, os marcadores sorológicos foram detectados nos 100 primeiros dias após o transplante, considerado o período de maior risco. Esses resultados indicam que os testes sorológicos podem ser úteis no monitoramento da infecção por CMV após o transplante de células progenitoras hematopoéticas, principalmente quando a N-PCR não for disponível.

Forty-six allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) patients were monitored for the presence of CMV antibodies, CMV-DNA and CMV antigens after transplantation. Immunoenzymatic serological tests were used to detect IgM and the increase in CMV IgG antibodies (increase IgG), a nested polymerase chain reaction (N-PCR) was used to detect CMV-DNA, and an antigenemia assay (AGM) was used to detect CMV antigens. The presence of CMV-IgM and/or CMV-increase IgG antibodies was detected in 12/46 (26.1%) patients, with a median time between HSCT and the detection of positive serology of 81.5 days. A positive AGM was detected in 24/46 (52.2%) patients, with a median time between HSCT and antigen detection of 62 days. Two or more consecutive positive N-PCR results were detected in 32/46 (69.5%) patients, with a median time between HSCT and the first positive PCR of 50.5 days. These results confirmed that AGM and mainly PCR are superior to serology for the early diagnosis of CMV infection. Six patients had CMV-IgM and/or CMV-increase IgG with a negative AGM (five cases) or N-PCR assay (one case). In five of these cases the serological markers were detected during the first 100 days after HSCT, the period of highest risk. These findings support the idea that serology may be useful for monitoring CMV infections in HSCT patients, especially when PCR is unavailable.

Racional - A deficiência de alfa-1-antitripsina é uma doença genética transmitida de forma autossômica co-dominante. As manifestações clínicas principais incluem acometimento pulmonar e hepático. Este último, apresenta-se como colestase neonatal, hepatite crônica ou cirrose. O diagnóstico definitivo é realizado pela análise bioquímica da alfa-1-antitripsina ou pela análise molecular. Objetivo - Investigar, em um grupo de 12 crianças com suspeita de deficiência de alfa-1-antitripsina, a presença efetiva da deficiência através da análise de DNA, para um diagnóstico definitivo, bem como a associação entre os deficientes de alfa-1-antitripsina com as características clínicas e laboratoriais encontradas. Casuística e Métodos - Foram investigados os alelos mutantes S e Z do gene da alfa-1-antitripsina em 12 pacientes com idade variando de 3 meses a 19 anos, encaminhadas pelo ambulatório de Gastroenterologia Pediátrica da Universidade Estadual de Campinas, SP, por apresentarem dosagem sérica de alfa-1-antitripsina inferior ao normal e/ou doença hepática sem etiologia definida. A análise de DNA foi realizada utilizando-se o método modificado de amplificação gênica pela reação em cadeia de polimerase que cria sítios de restrição para as enzimas Xmnl (alelo S) e Taq l (alelo Z). Resultados - Dos 12 pacientes encaminhados, 7 apresentavam doença hepática crônica sem etiologia definida e os outros 5 traziam dosagens séricas baixas de alfa-1-antitripsina acompanhadas do diagnóstico de colestase neonatal e/ou doença hepática crônica de etiologia desconhecida. Nesse grupo de 12 pacientes, foram observados cinco pacientes homozigotos Z (ZZ) e dois traziam o alelo S acompanhado de um outro alelo, diferente do Z (*S). Conclusão - Esses resultados mostram que a deficiência de A1AT é uma etiologia relativamente freqüente em crianças que apresentam doença hepática crônica sem etiologia definida e/ou dosagem sérica baixa de A1AT (41,6%). A importância de um diagnóstico de certeza para a deficiência é justificada não apenas para o seguimento clínico do paciente mas também, em termos de aconselhamento genético.

Background - Alpha-1-antitrypsin deficiency is a genetic disorder which is transmitted in a co-dominant, autosomal form. Alpha-1-antitrypsin deficiency affects mainly the lungs and the liver leading, in the latter case, to neonatal cholestasis, chronic hepatitis or cirrhosis. A precise diagnosis of Alpha-1-antitrypsin deficiency may be obtained by biochemical or molecular analysis. Objective - The purpose of this study was to use DNA analysis to examine the presence of an alpha-1-antitrypsin deficiency in 12 children suspected of having this deficiency and who showed laboratory and clinical characteristics of the disease. Patients and Methods - Twelve patients, aged 3 months to 19 years, who had serum alpha-1-antitrypsin levels lower than normal and/or had hepatic disease of undefined etiology were studied. The mutant alleles S and Z of the alpha-1-antitrypsin gene were investigated in the 12 children. Alpha-1-antitrypsin gene organization was analyzed by amplification of genoma through the polymerase chain reaction and digestion with the restriction enzymes Xmnl (S allele) and Taq 1 (Z allele). Results - Seven of the 12 patients had chronic liver disease of undefined etiology and the other five patients had low serum levels of alpha-1-antitrypsin as well as a diagnosis of neonatal cholestasis and/or chronic liver disease of undefined etiology. Five of the 12 patients were homozygous for the Z allele (ZZ) and two had the S allele with another allele (*S) different from Z. Conclusion - These results show that alpha-1-antitrypsin deficiency is relatively frequent in children with chronic hepatic disease of undefined etiology and/or low alpha-1-antitrypsin levels (41.6%). A correct diagnosis is important for effective clinical follow-up and for genetic counseling.

A criptococose é uma das infecções fúngicas mais comuns do sistema nervoso central (SNC) em pacientes com Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA), sendo meningoencefalite ou meningite manifestações freqüentemente observadas. Apesar disso, poucos são os estudos sistemáticos sobre a composição do líquido céfalo-raquidiano (LCR) de pacientes com SIDA e neurocriptococose. No presente estudo, foram analisadas amostras de LCR de 114 pacientes soropositivos para HIV, com queixa clínica sugestiva de envolvimento do SNC, sendo 32 com neurocriptococose (Grupo 1) e 82 sem doença neurológica identificada (Grupo 2). Considerando os resultados citológicos e bioquímicos, dois perfis liquóricos foram observados: Normal (Grupo 1 = 31%, Grupo 2 = 39%) e Anormal (Grupo 1 = 69%, Grupo 2 = 61%). Linfócitos foram as células predominantes em ambos os grupos. Nossos resultados mostram que, entre os pacientes com SIDA, anormalidades liquóricas são bastante freqüentes, inespecíficas e difíceis de serem interpretadas. Assim, entendemos que nessas condições, a análise do LCR deve, necessariamente, ser complementada pela busca sistemática do agente etiológico através de métodos microbiológicos e/ou imunológicos

Cryptococcosis is one of the most common fungal infections of the central nervous system (CNS) in AIDS patients and meningoencephalitis or meningitis is a frequently observed manifestation. However, systematic studies of cerebrospinal fluid (CSF) composition from AIDS patients with CNS cryptococcosis have been few. CSF samples from 114 HIV seropositive patients whose clinical complaint suggested CNS involvement, were analyzed; 32 samples from patients diagnosed as having neurocryptococcosis (Group 1) and 82 samples from patients with no identified neurological disfunction (Group 2). Based on cytological and biochemical results, two distinct profiles were observed: Normal (Group 1 = 31%, Group 2 = 39%); Abnormal (Group 1 = 69%, Group 2 = 61%). Lymphocytes were the most frequent cells in both groups. Our CSF cytological and biochemical findings showed that in AIDS patients liquoric abnormalities are quite frequent, non-specific and difficult to interpret. In these circumstances a systematic search to identify the etiologic agent using microbiological and/or immunological assays must be routinely performed

Preparações antigênicas de Strongyloides stercoralis para o imunodiagnóstico da estrongiloidíase têm sido tradicionalmente obtidas pela extração de antígenos do parasita com solução salina. No presente trabalho, após obtenção da preparação antigênica de S. stercoralis com extração salina, a fração residual foi solubilizada com uréia, e as duas preparações foram avaliadas para o imunodiagnóstico da estrongiloidíase, através de uma técnica imunoenzimática. Não foram encontradas diferenças significativas entre as duas preparações, em termos de atividade antigência específica e reatividade cruzada. A dificuldade de obtenção de larvas de S. stercoralis tem sido um fator limitante para o desenvolvimento de reações mais sensíveis e específicas que possam ser empregadas no imunodiagnóstico da estrongiloidíase. A possibilidade de um maior rendimento, em termos de material antigênico ativo, abre perspectivas de fracionamento do extrato bruto do parasita, na tentativa de se encontrar frações com maior atividade antigênica específica e menor reatividade cruzada.

Aqueous-soluble (AS) antigens from larvae of Strongyloides stercoralis, extracted with phosphate- buffered saline, are traditionally used for serodiagnosis of strongyloidiasis. To identify sources of antigensfor use in serodiagnosis, residual particulates from parasite larvae after aqueous extraction were solubilized with Tris-buffered 8M urea, yielding a urea-soluble (US) antigen fraction. Both AS and US antigens from S. stercoralis were evaluated by an enzyme-linked immunosorbent assay. No significalive differences were observed between AS and US antigens from the parasite regarding specific antigenic activity and cross-reactivity. lmmunoassays are highly dependent on the antigen for sensitivity and specificity. Crude extracts from S. stercoralis should be further studied, mainly in relation to antigenic fractions which could provide even more sensitive and specific results. Studies of fractionation of S. stercoralis must take into account the antigen yield of both the crude extract and fractions, since larvae of parasite are normally difficult to obtain. Considering this aspect, the results from this study are very useful, since the extraction with urea subslantialty increased the amounts of antigenic materiais normally obtained with the classical aqueous extraction.

Um extrato bruto de Cysticercus cellulosae foi fracionado por cromatografia em coluna de Sephadex G-200, com o objetivo de se encontrar alguma fração com alta atividade antigênica para ser utilizada no imunodiagnóstico da neurocisticercose. O perfil de eluição proteico da cromatografia revelou dois picos distintos (frações I e III) e, entre os dois uma fração bastante heterogênea composta de vários picos (fração II). Uma técnica baseada na utilização de conjugados contendo lectina com afinidade para eritrocitos (Erythro - LIT) foi utilizada para a avaliação das frações. Os títulos de Erythro-LIT obtidos com o extrato bruto de cisticercos e com as frações mostraram que a maior parte dos anticorpos anti Cysticercus cellulosae, presentes em amostras de líquido cefalorraqueano de pacientes com neurocisticercose, reconheceram componentes antigênicos da fração II.

In an attempt to find out some fraction with high antigenic activity for the immunodiagnosis of neurocysticercosis a crude extract from Cysticercus cellulosae was frac-tioned by Sephadex G-200 column chromatography. The protein elution profile revealed two distinct peaks (fractions I and III) and a heterogeneous fraction containing several peaks (fraction II). The crude extract and the fractions were tested by Erythro-Lectin Immuno Test (Erythro-LIT) using cerebrospinal fluid samples from patients with neurocysticercosis. The results of Erythro-LIT antibody titers showed that most of the anticysticercus antibodies recognized antigenic components contained in the fraction II.